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發(fā)布時(shí)間： 2022-09-21 點(diǎn)擊次數： 937次間質(zhì)膠原酶為膠原蛋白水解酶，可以在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構，而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì)，因此，它對溫度、PH和導致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質(zhì)。膠原酶是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬，內含較多結締組織或膠原成分時(shí)，用胰蛋白酶解離細胞的效果較差，這時(shí)可采用膠原酶解離細胞法。膠原酶僅對細胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為最終濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%。間質(zhì)膠原酶的使用：1、將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊。2、將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。3、將燒瓶放入37°C水浴或者37°C孵箱內,每隔3min振搖-次,如能放在37°C的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時(shí)間與組織的類(lèi)別很有關(guān)系，對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消化時(shí)間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37°C震蕩消化15~45min,也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細胞團或單個(gè)細胞，可以認為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后，由于上皮細胞對此酶有耐受性，可能仍有一些細胞團未*分散,但成團的上皮細胞比分散的單個(gè)上皮細胞更易生長(cháng),因此，如無(wú)特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理。4、收集消化液(有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒(méi)有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾)，離心1000r/min,5min,去除上清，用Hanks液或者無(wú)血清培養液離心漂洗1~2次,去除上清，加培養液制成細胞懸液,接種培養瓶。- 下一篇：羽翔生物國慶放假通知
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